Kiitos vierailustasi Nature.com. Käyttämäsi selainversiossa on rajoitettu CSS -tuki. Parhaat tulokset suosittelemme uudemman selaimen (tai yhteensopivuustilan käytöstä Internet Explorerissa) käyttämistä. Sillä välin, jatkuvan tuen varmistamiseksi näytämme sivuston ilman tyylejä ja JavaScriptiä.
Modisen muutoksen eläinmallien perustaminen (MC) on tärkeä perusta MC: n tutkimiselle. Viisikymmentäneljä Uuden-Seelannin valkoisia kaneja jaettiin Sham-operaatioryhmään, lihasten implantaatioryhmään (ME-ryhmä) ja ytimen Pulposus-implantaatioryhmään (NPE-ryhmä). NPE -ryhmässä nikamalevy paljastettiin anterolateraalisella lannerangan lähestymistavalla ja neulaa käytettiin L5 -selkärangan rungon puhkaisemiseen päätylevyn lähellä. NP uutettiin L1/2 -nikamalevystä ruiskulla ja injektoitiin siihen. Poraamalla reikä subkondraaliseen luuhun. Kirurgiset toimenpiteet ja porausmenetelmät lihaksen implantointiryhmässä ja huijausryhmässä olivat samat kuin NP-implantaatioryhmässä. ME-ryhmässä lihaskappale asetettiin reikään, kun taas huijausryhmässä mitään ei asetettu reikään. Toiminnan jälkeen suoritettiin MRI -skannaus ja molekyylibiologiset testit. NPE-ryhmän signaali muuttui, mutta sham-operaatioryhmässä ja ME-ryhmässä ei ollut selvää signaalin muutosta. Histologinen havainto osoitti, että implantaatiokohdassa havaittiin epänormaalia kudoksen lisääntymistä ja IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n ilmentyminen lisääntyi NPE-ryhmässä. NP: n implantointi subkondraaliseen luuhun voi muodostaa MC: n eläinmallin.
Modiset muutokset (MC) ovat selkärangan päätylevyjen ja viereisen luuytimen vaurioita, jotka ovat näkyvissä magneettikuvauskuvantamisessa (MRI). Ne ovat melko yleisiä yksilöillä, joilla on siihen liittyviä oireita1. Monissa tutkimuksissa on korostettu MC: n merkitystä sen yhteydenpidon vuoksi alaselän kipuun (LBP) 2,3. De Roos et ai.4 ja Modic et ai.5 Kuvasivat ensin kolme erityyppistä subkondraalisia signaalien poikkeavuuksia selkärangan luuytimessä. Tyypin I muodolliset muutokset ovat hypointensiivisia T1-painotetuissa (T1W) sekvensseissä ja hyperintensiivisissä T2-painotetuissa (T2W) sekvensseissä. Tämä vaurio paljastaa halkeamien päätylevyjä ja viereisiä verisuonen rakeista kudoksen luuytimessä. Modic Type II -muutokset osoittavat suurta signaalia sekä T1W- että T2W -sekvensseissä. Tämän tyyppisessä vauriossa löytyy päätylevyn tuhoaminen sekä viereisen luuytimen histologinen rasvakorvaus. Modic -tyypin III muutokset osoittavat alhaisen signaalin T1W- ja T2W -sekvensseissä. Päätylevyjä vastaavat skleroottiset leesiot on havaittu6. MC: tä pidetään selkärangan patologisena sairautena ja se liittyy läheisesti selkärangan moniin rappeuttaviin sairauksiin.
Käytettävissä olevien tietojen perusteella useat tutkimukset ovat tarjonneet yksityiskohtaisia näkemyksiä MC: n etiologiasta ja patologisista mekanismeista. Albert et ai. ehdotti, että MC voi johtua Disc Herniation8: sta. Hu et ai. MC: n ansiosta vakava levyn rappeutuminen10. Kroc ehdotti ”sisäisen levyn repeämän käsitettä”, jossa todetaan, että toistuva kiekkovammat voivat johtaa mikrotereihin päätylevyllä. Järkymuodostuksen jälkeen ytimen Pulposuksen (NP) päätylevyn tuhoaminen voi laukaista autoimmuunivasteen, mikä johtaa edelleen MC11: n kehitykseen. Ma et ai. jakoi samanlaisen näkemyksen ja kertoi, että NP: n indusoima autoimmuniteetti on avainasemassa MC12: n patogeneesissä.
Immuunijärjestelmän soluilla, erityisesti CD4+ T -auttajan lymfosyyteillä, on kriittinen rooli autoimmuniteetin13 patogeneesissä. Äskettäin löydetty Th17-alajoukko tuottaa tulehduksen proinflammatorisen sytokiini IL-17: n, edistää kemokiini-ekspressiota ja stimuloi T-soluja vaurioituneissa elimissä IFN-y14: n tuottamiseksi. Th2 -soluilla on myös ainutlaatuinen rooli immuunivasteiden patogeneesissä. IL-4: n ekspressio edustavana Th2-soluna voi johtaa vakaviin immunopatologisiin seurauksiin15.
Vaikka MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 on tehty monia kliinisiä tutkimuksia, sopivia eläinten kokeellisia malleja puuttuu edelleen, mikä voi jäljitellä MC -prosessia, jota usein tapahtuu ihmisillä ja jotka voivat olla Käytetään etiologian tai uusien hoitojen, kuten kohdennettujen terapian, tutkimiseen. Tähän päivään mennessä vain muutamien MC: n eläinmallien on ilmoitettu tutkivan taustalla olevia patologisia mekanismeja.
Albertin ja MA: n ehdottaman autoimmuuniteorian perusteella tämä tutkimus perusti yksinkertaisen ja toistettavan kanin MC -mallin autotransplantoimalla NP lähellä poratun selkärangan päätylevyä. Muita tavoitteita on tarkkailla eläinmallien histologisia ominaisuuksia ja arvioida NP: n erityisiä mekanismeja MC: n kehityksessä. Tätä varten käytämme tekniikoita, kuten molekyylibiologia, MRI ja histologiset tutkimukset MC: n etenemisen tutkimiseksi.
Kaksi kania kuoli verenvuotoon leikkauksen aikana, ja neljä kania kuoli anestesian aikana MRI: n aikana. Jäljellä olevat 48 kania selvisivät eivätkä osoittaneet käyttäytymistä tai neurologisia merkkejä leikkauksen jälkeen.
MRI osoittaa, että upotetun kudoksen signaalin voimakkuus eri reikissä on erilainen. L5 -selkärangan kehon signaalin voimakkuus NPE -ryhmässä muuttui vähitellen 12, 16 ja 20 viikossa insertion jälkeen (T1W Kahdesta muusta sulautettujen osien ryhmistä pysyivät suhteellisen vakaina saman ajanjakson aikana (kuva 1A, B).
(A) Kanin lannerangan edustavat peräkkäiset MRI: t 3 ajankohdassa. Signaalien poikkeavuuksia ei löytynyt huijausryhmän kuvista. (B) ME-ryhmän selkärangan kehon signaaliominaisuudet ovat samanlaisia kuin huijausryhmässä, eikä upotuskohdassa havaita merkittävää signaalin muutosta ajan myötä. (C) NPE -ryhmässä matala signaali on selvästi näkyvissä T1W -sekvenssissä, ja sekoitettu signaali ja matala signaali ovat selvästi näkyvissä T2W -sekvenssissä. 12 viikon ajanjaksosta 20 viikon ajanjaksoon satunnaiset korkeat signaalit, jotka ympäröivät pieniä signaaleja T2W-sekvenssin pienenemisessä.
NPE -ryhmän selkärangan implantaatiokohdassa voidaan nähdä ilmeistä luun hyperplasiaa, ja luun hyperplasia tapahtuu nopeammin 12 - 20 viikosta (kuva 2c) verrattuna NPE -ryhmään, mallinnetussa selkärangassa ei havaita merkittävää muutosta. ruumiit; Sham Group ja Me -ryhmä (kuva 2C) 2A, B).
(A) Nikaman rungon pinta implantoidussa osassa on erittäin sileä, reikä paranee hyvin, eikä selkärangan rungossa ole hyperplasiaa. (B) Implantoidun alueen muoto ME -ryhmässä on samanlainen kuin Sham -operaatioryhmässä, eikä implantoidun alueen ulkonäköä ole ilmeistä muutosta ajan myötä. (C) Luuhyperplasia esiintyi NPE -ryhmän istutetussa paikassa. Luun hyperplasia kasvoi nopeasti ja jopa ulottui nikamalevyn läpi kontralateraaliseen selkärangan runkoon.
Histologinen analyysi tarjoaa yksityiskohtaisempaa tietoa luun muodostumisesta. Kuvio 3 esittää valokuvia leikkauksen jälkeisistä osista, jotka on värjätty H&E: llä. Hammasoperaatioryhmässä kondrosyytit olivat hyvin järjestettyjä eikä solujen lisääntymistä havaittu (kuvio 3A). ME-ryhmän tilanne oli samanlainen kuin sham-operaatioryhmässä (kuva 3B). NPE-ryhmässä kuitenkin havaittiin suuri määrä kondrosyyttejä ja NP: n kaltaisten solujen lisääntymistä implantaatiokohdassa (kuva 3C);
(A) Trabekulat voidaan nähdä lähellä päätylevyä, kondrosyytit on järjestetty siististi tasaisen solun koon ja muodon kanssa eikä proliferaatiota (40 kertaa). (B) Implantaatiokohdan tila ME -ryhmässä on samanlainen kuin huijausryhmän. Trabeculae ja kondrosyytit ovat nähtävissä, mutta implantaatiokohdassa ei ole selvää lisääntymistä (40 kertaa). (B) Voidaan nähdä, että kondrosyytit ja NP: n kaltaiset solut lisääntyvät merkittävästi ja kondrosyyttien muoto ja koko ovat epätasaisia (40 kertaa).
Interleukiini 4 (IL-4) mRNA: n, interleukiini 17 (IL-17) mRNA: n ja interferoni y (IFN-y) mRNA: n ekspressio havaittiin sekä NPE- että ME-ryhmissä. Kun kohdegeenien ekspressiotasoja verrattiin, IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n geeniekspressioita lisääntyivät merkittävästi NPE-ryhmässä verrattuna ME-ryhmän ja Sham-operaatioryhmän tasoihin (kuva 4) (P <0,05). Verrattuna huijausoperaatioryhmään, IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n ekspressiotasot ME-ryhmässä nousivat vain hiukan ja eivät saavuttaneet tilastollista muutosta (p> 0,05).
IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n mRNA-ekspressiossa NPE-ryhmässä osoittivat huomattavasti suuremman trendin kuin Sham-operaatioryhmässä ja ME-ryhmässä (p <0,05).
Sitä vastoin ME -ryhmän ekspressiotasot eivät osoittaneet merkittävää eroa (p> 0,05).
Western blot -analyysi suoritettiin käyttämällä kaupallisesti saatavia vasta-aineita IL-4: tä ja IL-17: tä vastaan muuttuneen mRNA-ekspressiokuvion vahvistamiseksi. Kuten kuvioissa 5A, B, verrattuna ME-ryhmään ja Sham-operaatioryhmään, IL-4: n ja IL-17: n proteiinitasot NPE-ryhmässä nousivat merkittävästi (p <0,05). Verrattuna huijausoperaatioryhmään, IL-4: n ja IL-17: n proteiinitasot ME-ryhmässä eivät myöskään saavuttaneet tilastollisesti merkitseviä muutoksia (p> 0,05).
(A) IL-4: n ja IL-17: n proteiinitasot NPE-ryhmässä olivat merkittävästi korkeammat kuin ME-ryhmän ja lumelääkeryhmän (p <0,05). (B) Western blot -histogrammi.
Leikkauksen aikana saatujen ihmisen näytteiden rajoitetun määrän vuoksi MC: n patogeneesistä selkeät ja yksityiskohtaiset tutkimukset ovat jonkin verran vaikeita. Yritimme perustaa MC: n eläinmallin tutkia sen mahdollisia patologisia mekanismeja. Samanaikaisesti käytettiin radiologista arviointia, histologista arviointia ja molekyylin biologista arviointia NP AutoGraftin indusoiman MC: n kulkua. Seurauksena on, että NP-implantaatiomalli johti signaalin voimakkuuden asteittaiseen muutokseen 12 viikosta 20 viikon ajankohtaan (sekoitettu matala signaali T1W-sekvensseissä ja matala signaali T2W-sekvensseissä), mikä osoittaa kudosmuutoksia sekä histologista ja molekyyliä Biologiset arviot vahvistivat radiologisen tutkimuksen tulokset.
Tämän kokeen tulokset osoittavat, että visuaaliset ja histologiset muutokset tapahtuivat NPE -ryhmän selkärangan rungon rikkomisen kohdalla. Samanaikaisesti havaittiin IL-4: n, IL-17- ja IFN-y-geenien, samoin kuin IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n, ilmentyminen, IL-4, IL-17 ja IFN-y, mikä osoittaa, että autologisen ytimen massakudoksen rikkominen selkärangassa Runko voi aiheuttaa sarjan signaalia ja morfologisia muutoksia. On helppo huomata, että eläinmallin selkärangan signaaliominaisuudet (T1W -sekvenssin alhainen signaali, sekoitettu signaali ja matala signaali T2W -sekvenssissä) ovat hyvin samanlaisia kuin ihmisen selkärangan solujen ja myös MRI -ominaisuudet, ja MRI -ominaisuudet myös MRI -ominaisuudet Vahvista histologian ja brutto -anatomian havainnot, toisin sanoen selkärangan kehon solujen muutokset ovat edistyneitä. Vaikka akuutin trauman aiheuttama tulehduksellinen vaste voi ilmestyä pian puhkaisun jälkeen, MRI -tulokset osoittivat, että asteittain kasvavat signaalin muutokset ilmestyivät 12 viikkoa puhkaisun jälkeen ja jatkuivat 20 viikkoon ilman merkkejä MRI -muutosten palautumisesta tai kääntämisestä. Nämä tulokset viittaavat siihen, että autologinen selkärangan NP on luotettava menetelmä progressiivisen MV: n määrittämiseksi kaneille.
Tämä puhkaisemalli vaatii riittävän taiton, ajan ja kirurgisen ponnistelun. Alustamiskokeissa paravertebral -ligamentousrakenteiden leikkaus tai liiallinen stimulaatio voi johtaa selkärangan osteofyyttien muodostumiseen. Viereisten levyjen vahingoittamista tai ärsyttämistä ei pidä huolehtia. Koska tunkeutumisen syvyyttä on ohjattava johdonmukaisten ja toistettavien tulosten saamiseksi, teimme tulpan manuaalisesti leikkaamalla 3 mm: n pitkän neulan vaipan. Tämän pistokkeen käyttäminen varmistaa selkärangan kehon tasaisen poraussyvyyden. Alustavissa kokeissa kolme operaatioon osallistuvaa ortopedista kirurgia havaitsivat 16-mittaisen neulan olevan helpompaa työskennellä yli 18-mittaisten neulojen tai muiden menetelmien kanssa. Liiallisen verenvuodon välttämiseksi porauksen aikana neulan pitäminen vielä jonkin aikaa tarjoaa sopivamman lisäysreiän, mikä viittaa siihen, että tiettyä MC: tä voidaan hallita tällä tavalla.
Vaikka monet tutkimukset ovat kohdistaneet MC: tä, MC25,26,27: n etiologiasta ja patogeneesistä ei tiedetä vähän. Aikaisempien tutkimusten perusteella havaitsimme, että autoimmuniteetti on avainasemassa MC12: n esiintymisessä ja kehityksessä. Tässä tutkimuksessa tutkittiin IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n kvantitatiivista ekspressiota, jotka ovat CD4+ -solujen tärkeimmät erilaistumisreitit antigeenin stimulaation jälkeen. Tutkimuksessamme verrattuna negatiiviseen ryhmään NPE-ryhmällä oli korkeampi IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n ilmentyminen, ja myös IL-4: n ja IL-17: n proteiinitasot olivat myös korkeammat.
Kliinisesti IL-17-mRNA-ekspressio lisääntyy NP-soluissa potilaista, joilla on DISC Hernation28. Lisääntyneet IL-4- ja IFN-y-ekspressiotasot havaittiin myös akuutista ei-kompressioista levyn herniaatiomallista verrattuna terveisiin kontrolleihin29. IL-17: llä on avainasemassa tulehduksessa, kudosvaurioissa autoimmuunisairauksissa30 ja parantaa immuunivastetta IFN-y31: lle. Parannettu IL-17-välitteinen kudosvaurio on raportoitu MRL/LPR-hiirissä32 ja autoimmuniteetti-herkkailla hiirillä33. IL-4 voi estää proinflammatoristen sytokiinien (kuten IL-1β ja TNFa) ja makrofagien aktivointi34 ekspression. Raportoitiin, että IL-4: n mRNA-ekspressio oli erilainen NPE-ryhmässä verrattuna IL-17: een ja IFN-y: hen samaan aikaan; IFN-y: n mRNA-ekspressio NPE-ryhmässä oli merkittävästi korkeampi kuin muissa ryhmissä. Siksi IFN-y: n tuotanto voi olla välittäjä NP-interkalaation aiheuttamasta tulehduksellisesta vasteesta. Tutkimukset ovat osoittaneet, että IFN-y: tä tuotetaan useissa solutyypeissä, mukaan lukien aktivoidut tyypin 1 auttaja-T-solut, luonnolliset tappajasolut ja makrofagit35,36 ja ovat keskeinen tulehdusta edistävä sytokiini, joka edistää immuunivasteita37.
Tämä tutkimus viittaa siihen, että autoimmuunivaste voi olla mukana MC: n esiintymisessä ja kehityksessä. Luoma et ai. havaitsi, että MC: n ja näkyvän NP: n signaaliominaisuudet ovat samanlaisia MRI: llä ja molemmat osoittavat suurta signaalia T2W -sekvenssillä38. Joidenkin sytokiinien on vahvistettu liittyvän läheisesti MC: n esiintymiseen, kuten IL-139. Ma et ai. ehdotti, että NP: n ylöspäin tai alaspäin suuntautuvalla ulkonemisella voi olla suuri vaikutus MC12: n esiintymiseen ja kehitykseen. Bobechko40 ja Herzbein et al.41 kertoivat, että NP on immunotolerantti kudos, joka ei pääse verisuonen verenkiertoon syntymästä lähtien. NP -ulkonemat tuovat vieraita elimiä verenkiertoon, välittäen siten paikallisia autoimmuunireaktioita42. Autoimmuunireaktiot voivat indusoida suuren määrän immuunitekijöitä, ja kun nämä tekijät altistetaan jatkuvasti kudoksille, ne voivat aiheuttaa muutoksia signaloimisessa43. Tässä tutkimuksessa IL-4: n, IL-17: n ja IFN-y: n yliekspressio on tyypillisiä immuunitekijöitä, mikä osoittaa edelleen NP: n ja MCS44: n läheisen suhteen. Tämä eläinmalli jäljittelee hyvin NP -läpimurtoa ja pääsyä päätylevyyn. Tämä prosessi paljasti edelleen autoimmuniteetin vaikutuksen MC: hen.
Kuten odotettiin, tämä eläinmalli tarjoaa meille mahdollisen alustan MC: n tutkimiseksi. Tällä mallilla on kuitenkin vielä joitain rajoituksia: Ensinnäkin eläinten tarkkailuvaiheen aikana jotkut välivaiheen kanit on lopetettava histologisten ja molekyylibiologian testaamiseksi, joten jotkut eläimet ”putoavat käytöstä” ajan myötä. Toiseksi, vaikka tässä tutkimuksessa asetetaan kolme aikapistettä, valitettavasti mallinnimme vain yhden tyypin MC: tä (tyypin I modic I Parempi tarkkaile kaikkia signaalimuutoksia. Kolmanneksi, kudosrakenteen muutokset voidaan todellakin osoittaa selvästi histologisella värjäyksellä, mutta jotkut erikoistuneet tekniikat voivat paremmin paljastaa tämän mallin mikrorakenteelliset muutokset. Esimerkiksi polarisoitua valonmikroskopiaa käytettiin fibrokartilan muodostumisen analysointiin kanin nikamalevyissä45. NP: n pitkän aikavälin vaikutukset MC: hen ja päätylevyyn vaativat lisätutkimuksia.
Viisikymmentäneljä urospuolista Uuden-Seelannin valkoisia kaneja (paino noin 2,5–3 kg, ikä 3-3,5 kuukautta) jaettiin satunnaisesti Sham-operaatioryhmään, lihasten implantaatioryhmään (ME-ryhmä) ja hermojuurten implantaatioryhmään (NPE-ryhmä). Tianjinin sairaalan eettinen komitea hyväksyi kaikki kokeelliset menettelyt, ja kokeelliset menetelmät suoritettiin tiukasti hyväksyttyjen ohjeiden mukaisesti.
S. Sobajima 46: n kirurgiseen tekniikkaan on tehty joitain parannuksia. Jokainen kani asetettiin sivuttaismuotoiseen asentoon ja viiden peräkkäisen lannerangan levyn (IVD) etupinta paljastettiin käyttämällä posterolateraalista retroperitoneaalista lähestymistapaa. Jokaiselle kanille annettiin yleinen anestesia (20% uretaani, 5 ml/kg korvalaskun kautta). Kylkiluiden alareunasta tehtiin pitkittäinen ihon viilto lantion reunaan, 2 cm: n ventraaliin paravertebral -lihaksiin. Oikea anterolateraalinen selkäranka L1: stä L6: een paljastettiin terävällä ja tylsällä leikkauksella yläpuolella olevasta ihonalaisesta kudoksesta, retroperitoneaalisesta kudoksesta ja lihaksista (kuva 6A). Levyn taso määritettiin käyttämällä lantion reunaa anatomisena maamerkkinä L5-L6-levytasolle. Poraa reikä L5-selkärangan päätylevyn lähellä 3 mm: n syvyyteen (kuva 6B). Käytä 5 ml: n ruiskua imemään autologinen ytimen mulposus L1-L2-nikamalevyllä (kuvio 6C). Poista ydin mulposus tai lihakset kunkin ryhmän vaatimusten mukaisesti. Kun poran reikä on syventynyt, absorboivia ompeleita asetetaan syvälle fascialle, pinnalle fascialle ja iholle, huolehtimaan siitä, ettei selkärangan kehon periosteaalista kudosta leikkauksen aikana.
(A) L5 - L6 -levy paljastetaan posterolateraalisen retroperitoneaalisen lähestymistavan avulla. (B) Poraa reiän lähellä L5-päätylevyä lähellä 16-mittaista neulaa. C) Autologiset MF: t korjataan.
Yleistä anestesiaa annettiin 20 -prosenttisella uretaanilla (5 ml/kg), jota annettiin korvasuoneen kautta, ja lannerangan radiografia toistettiin 12, 16 ja 20 viikossa leikkauksen jälkeen.
Kanit uhrattiin ketamiinin (25,0 mg/kg) ja laskimonsisäisen natriumpentobarbitaalin (1,2 g/kg) injektionauhalla 12, 16 ja 20 viikkoa leikkauksen jälkeen. Koko selkäranka poistettiin histologista analyysiä varten ja todellinen analyysi suoritettiin. Kvantitatiivista käänteistä transkriptiota (RT-QPCR) ja Western-blottausta käytettiin immuunitekijöiden muutosten havaitsemiseksi.
MRI -tutkimukset suoritettiin kaneilla käyttämällä 3,0 T: n kliinistä magneettia (GE Medical Systems, Firenze, SC), joka oli varustettu ortogonaalisella raajojen kelavastaanottimella. Kanit nukutettiin 20-prosenttisella uretaanilla (5 ml/kg) korvasuonen kautta ja asetettiin sitten magneettiin magneettiin, jonka lannerangan alue oli keskitetty 5 tuuman halkaisijaltaan pyöreään pintakela (GE Medical Systems). Coronal T2 -painotetut lokalisoijakuvat (TR, 1445 ms; Te, 37 ms) hankittiin lannerangan sijainnin määrittelemiseksi L3-L4: stä L5-L6: een. Sagittaalitaso T2-painotetut viipaleet hankittiin seuraavilla asetuksilla: Nopea spin-lounjakso, jonka toistoaika (TR) oli 2200 ms ja kaiku-aika (TE) 70 ms, matriisi; visuaalinen kenttä 260 ja kahdeksan ärsykettä; Leikkauspaksuus oli 2 mm, rako oli 0,2 mm.
Kun viimeinen valokuva on otettu ja viimeinen kani tapettiin, huijaus, lihakseen upotettu ja NP-levyt poistettiin histologista tutkimusta varten. Kudokset kiinnitettiin 10 -prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin yhden viikon ajan, dekaloituneeksi etyleenidiaminetraaetikkahapolla ja parafiinilla leikattuja parafiinia. Kudoslohkot upotettiin parafiiniin ja leikattiin sagitaalileikkeiksi (paksuus 5 μm) käyttämällä mikrotomia. Leikkeet värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H&E).
Kerättyään selkärankalevyjä kunkin ryhmän kaneista, kokonais-RNA uutettiin käyttämällä UNIQ-10-pylvästä (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kiina) valmistajan ohjeiden ja IIR II: n käänteistranskriptiojärjestelmän (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Käänteinen transkriptio suoritettiin.
RT-QPCR suoritettiin käyttämällä PRISM 7300: ta (Applied Biosystems Inc., USA) ja SYBR Green Jump Start Taq Reaumix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. PCR -reaktiotilavuus oli 20 μl ja sisälsi 1,5 μl laimennettua cDNA: ta ja 0,2 μm kutakin aluketta. Alukkeet on suunnitellut Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) ja valmistettu Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kiina) (taulukko 1). Käytettiin seuraavia lämpösyklioolosuhteita: Alkuperäinen polymeraasin aktivaatiovaihe 94 ° C: ssa 2 minuutin ajan, sitten 40 sykliä 15 sekunnissa 94 ° C: ssa templaattien denaturointia varten hehkutus 1 minuutin ajan 60 ° C: ssa, jatke ja fluoresenssi. Mittaukset suoritettiin 1 minuutin ajan 72 ° C: ssa. Kaikki näytteet monistettiin kolme kertaa ja keskiarvoa käytettiin RT-QPCR-analyysiin. Vahvistustiedot analysoitiin käyttämällä FlexStation 3: ta (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17 ja IFN-y-geeniekspressio normalisoitiin endogeeniseen kontrolliin (ACTB). Kohde-mRNA: n suhteelliset ekspressiotasot laskettiin käyttämällä 2-δACT-menetelmää.
Kokonaisproteiini uutettiin kudoksista käyttämällä kudoshomogenisaattoria RIPA -hajotuspuskurissa (joka sisälsi proteaasi- ja fosfataasin estäjä cocktail) ja sentrifugoitiin sitten 13 000 rpm: llä 20 minuutin ajan 4 ° C: ssa kudosroskien poistamiseksi. Viisikymmentä mikrogrammaa proteiinia ladattiin kaistaa kohti, erotettiin 10% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin sitten PVDF-kalvoon. Esto suoritettiin 5%: n rasvatonta kuivamaidossa tris-puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS), joka sisälsi 0,1% Tween 20: tä 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Kalvoa inkuboitiin kanin anti-dekoriinin primaarisen vasta-aineen kanssa (laimennettu 1: 200; Boster, Wuhan, Kiina) (laimennettu 1: 200; Bios, Peking, Kiina) yön yli 4 ° C: ssa ja reagoi toisina päivinä; sekundaarisella vasta-aineella (vuohen anti-kani immunoglobuliini G 1: 40 000 laimennuksella) yhdistettynä piparjuuriperoksidaasiin (Boster, Wuhan, Kiina) yhden tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Western blot -signaalit havaittiin lisääntyneellä kemiluminesenssilla kemiluminesenssikalvossa röntgensäteilytyksen jälkeen. Densitometristä analyysiä varten blotit skannattiin ja kvantifioitiin käyttämällä bandscan -ohjelmistoa ja tulokset ekspressoitiin kohdegeenismunoreaktiivisuuden suhteena tubuliinin immunoreaktiivisuuteen.
Tilastolliset laskelmat suoritettiin käyttämällä SPSS16.0 -ohjelmistopakettia (SPSS, USA). Tutkimuksen aikana kerätyt tiedot ilmaistiin keskiarvona ± keskihajonta (keskiarvo ± SD) ja analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista toistuvia mittausanalyysiä varianssianalyysi (ANOVA) kahden ryhmän välisten erojen määrittämiseksi. P <0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevänä.
Siten MC: n eläinmallin perustaminen implantoimalla autologiset NP: t selkärangan runkoon ja suorittamalla makroanatomisia havaintoja, MRI interventiot.
Kuinka mainita tämä artikkeli: Han, C. et ai. Modisten muutosten eläinmalli määritettiin implantoimalla autologinen ydin mulposus lannerangan subkondraaliseen luuhun. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. ja Boos, N. Lanneranan magneettikuvaus: levyn herniaation ja retentio, hermojuuren puristus, loppulevyn poikkeavuudet ja nivel nivelrikko ja pintaosan nivelki . korko. Radiology 209, 661–666, doi: 10.1148/radiologia.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS ja Leboeuf-Ope, K. Modiset muutokset ja niiden suhde kliinisiin havaintoihin. Eurooppalainen selkärangan päiväkirja: Euroopan selkärankayhdistyksen virallinen julkaisu, Euroopan selkärangan epämuodostuman yhdistys ja Euroopan kohdunkaulan selkärankatutkimusyhdistys 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et ai. Modiset muutokset lannerangan päätylevyissä: esiintyvyys ja yhteys alaselän kipuun ja iskiaseen keski-ikäisten miestyöntekijöiden kanssa. Selkäranka 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. ja Dalinka, M. MRI luuytimen muutokset lähellä päätylevyä lannerangan rappeuttavassa sairaudessa. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ ja Carter, JR -rappeuttava levytauti: Selkärangan luuytimen arviointi MRI: n kanssa. Radiology 166, 193–199, doi: 10.1148/radiologia.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS ja Carter, JR -kuvantaminen rappeuttavan levytaudin. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologia.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et ai. Neoverteekan päätylevyn (MODIC) signaalimuutosten ennustajat väestössä. Eurooppalainen selkärangan päiväkirja: Euroopan selkärankayhdistyksen virallinen julkaisu, Euroopan selkärangan epämuodostuman yhdistys ja Euroopan kohdunkaulan selkärangan yhdistys, osasto 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB ja Mannisch, K. Modic muuttuu lannerangan herniation jälkeen. European Spine Journal: Euroopan selkärankayhdistyksen virallinen julkaisu, Euroopan selkärangan epämuodostuman yhdistys ja Euroopan kohdunkaulan selkärankatutkimusyhdistys 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kertula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. ja Kaapa, E. Modinen tyypin I muutokset voivat ennustaa nopeasti etenevän muodonmuutoslevyn rappeutumisen: 1 vuoden tulevaisuuden tutkimus. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ ja tuuletin, SW -modiset muutokset: mahdolliset syyt ja vaikutus lannerangan rappeutumiseen. Lääketieteelliset hypoteesit 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV: n sisäinen levy repeämä. Levyn prolapsit ongelmat yli 50 vuotta. Selkäranka (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
Viestin aika: joulukuu-13-2024